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标题: 化学发光的原理 [打印本页]
作者: bobyoung    时间: 2005-3-21 16:49
标题: 化学发光的原理
化学发光是物质在进行化学反应过程中伴随的一种光辐射现象，可以分为直接发光和间接发光。直接发光是最简单的化学发光反应，有两个关键步骤组成：即激发和辐射。如A、B两种物质发生化学反应生成C物质，反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*，处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。这里C*是发光体，此过程中由于C直接参与反应，故称直接化学发光。

间接发光又称能量转移化学发光，它主要由三个步骤组成：首先反应物A和B反应生成激发态中间体C*(能量给予体)；当C*分解时释放出能量转移给F(能量接受体)，使F被激发而跃迁至激发态F*；最后，当F*跃迁回基态时，产生发光。

一个化学反应要产生化学发光现象, 必须满足以下条件: 第一是该反应必须提供足够的激发能, 并由某一步骤单独提供, 因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光; 第二是要有有利的反应过程, 使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态; 第三是激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子, 或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。

　　化学发光分析测定的物质可以分为三类：第一类物质是化学发光反应中的反应物；第二类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或抑制剂；第三类物质是偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂等。这三类物质还可以通过标记方式用来测定其他物质，进一步扩大化学发光分析的应用范围。

化学发光反应的发光类型通常分为闪光型（flash type）和辉光型（glow type）两种。闪光型发光时间很短，只有零点几秒到几秒。辉光型又称持续型，发光时间从几分钟到几十分钟，或几小时至更久。闪光型的样品必须立即测量，必须配以全自动化的加样及测量仪器。辉光型样品的测量可以使用通用型仪器，也可以配有全自动化仪器。本产品针对辉光型化学发光反应进行检测。
作者: bobyoung    时间: 2005-3-21 16:51
化学发光免疫分析

化学发光免疫分析(CLIA)是借助于化学发光反应的高灵敏性和免疫反应的高特异性而建立的一种测定方法，是继荧光免疫分析法、酶免疫分析法和放射免疫分析法之后，在近年迅速发展起一种新型免疫分析技术。它包括化学发光物质的化学发光免疫分析、标记酶的化学发光酶免疫分析和标记荧光化学发光免疫分析。1977年，Halman第一次把化学发光与免疫分析结合，1980年化学发光免疫分析(CLIA)的概念首次出现，90年代以来，CLIA发展更为成熟，应用领域更为广泛。

由于化学发光免疫分析是以发光剂标记或酶标记进行测定的，使其灵敏度可以赶上甚至超过放射免疫分析。章竹君等在国内最早建立了偶合反应化学发光酶联免疫分析法，成功地应用于流动出血热病人的IgM和乙型肝炎病人表面抗原抗体、甲胎蛋白、铁蛋白等的测定。他们还以HRP标记粪样中的轮状病毒，将双孵式免疫技术改进成单孵式多层免疫技术，以鲁米诺增强化学发光测定了轮状病毒，方法的灵敏度是常规化学发光酶联免疫分析的4倍，特异性、阳性检出率均有提高。Brown等用苯氧取代的吖啶酯作为葡萄糖氧化酶活性的长寿命发光指示剂，测定促甲状腺激素(TSH)检出限可达0.18fmol，线性范围为0.2-1.65pmol/孔。

由于体液免疫检测项目的不同，试剂生产厂商成熟技术的差异，化学发光试剂选择的发光体系可能不同，采用的发光剂、增敏剂、催化剂、标记酶等都可能存在相当的差异。
作者: bobyoung    时间: 2005-3-21 16:54
化学发光免疫分析的定量依据

　　化学发光反应之所以能用于分析测定, 是因为化学发光强度( ICL ) 取决于反应的速度(dP/dt) 和化学发光量子效率（对于特定的化学发光反应, 为一定值）。

　　原则上讲，对任何化学发光反应，只要反应是一级或假一级反应，都可以进行化学发光定量分析。如：在上述反应中，若B浓度保持恒定，A浓度变化可视为一级或假一级反应，则化学发光强度与A 的浓度成正比。

作者: bobyoung    时间: 2005-3-21 17:04

化学发光免疫分析的检测手段

　　化学发光的原理知之甚早，但化学发光免疫分析仪还是伴随光电倍增管的出现才迅速发展起来的。化学发光的光强十分微弱，一般的探测器无法探测出。光电倍增管利用外光电效应把微弱光转换为光电子，并使光电子获得倍增，从而实现了微光的检测。在化学发光分析仪器中，光电倍增管是最关键的部件，它实现了光信号向电信号的转变。后续的工作就是信号处理及控制了，具体的做法这里就不多说了。

作者: wqehand    时间: 2005-3-22 00:42
好帖子
版主辛苦了
作者: raylife    时间: 2005-3-22 01:53

我是新来的

谢谢斑竹！

作者: bobyoung    时间: 2005-3-23 16:36

这是我们应该做的

作者: bobyoung    时间: 2005-3-24 21:34
化学发光技术是近二、三十年来发展起来的一种测定方式，其利用化学反应释放的自由能激发中间体(常用碱性磷酸酶－金刚烷胺），使其从激发态回到基态，当中间体从激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而进行定量分析。化学发光具有荧光的特异性，同时不需要激发光，就避免了荧光分析中激发光杂散光的影响有很高的灵敏度，并且不象放射分析那样存在强烈的环境污染和健康危害，是一种非常优秀的定量分析方法。

　　虽然化学发光具备很高的特异性和很小的干扰，但化学分析本身的不特异性，制约了整个方法的使用。因此，如同RIA、FIA等一样利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性形成了目前所说的化学发光免疫测定（CLIA）技术。

　　CLIA是一种高度敏感的微量测定技术，凡具有抗原性的物质（包括半抗原）都可以用CLIA测定。其起步于80年代初，快速发展于90年代，在国外CLIA的应用处于蓬勃发展的阶段,其具备以下特点

　　①高度敏感，极限达10-17－10-19M/L，远高于RIA、EIA，与TRFIA相当但比TRFIA便宜。

　　②特异性强，重复性好C.V.＜5％。

　　③测定范围宽，可达7个数量级。

　　④试剂稳定性好，无污染有效期6－12月。

　　⑤操作简单，易于自动化。

　　在对环保很重视的国家，CLIA成了取代RIA的首选方法。

  1. SCRIPT event=onload for=window type=text/javascript
  2. ImgLoad(document.getElementById("BodyLabel"));
  3. script
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作者: hx0999    时间: 2005-3-25 17:11
值得一看的好贴。。。。。。



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